Sistema di test immunologico in chemiluminescenza

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Che cos'è il test immunologico in chemiluminescenza (CLIA)?

 

CLIA è una tecnica per determinare le concentrazioni dei campioni in base all'intensità della luce emessa da una reazione chimica e biologica. I sistemi di chemiluminescenza (CL) e le immunoreazioni sono combinati in CLIA. Alcune sostanze chimiche sono state utilizzate come etichette CL e il sistema genera chemiluminescenza quando vengono aggiunti i substrati CL, consentendo la misurazione dei campioni. I substrati CL più frequenti includono il luminolo, i suoi derivati, la fosfatasi alcalina (ALP), la perossidasi e i composti dell'estere di acridinio. Nella CLIA l'enzima viene utilizzato anche per la marcatura delle proteine ​​bersaglio. L'ALP e la perossidasi di rafano sono ampiamente utilizzate per la marcatura degli enzimi.

 

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Principio CLIA

Il test immunologico in chemiluminescenza contiene due sistemi, il test immunologico e il test in chemiluminescenza. Il sistema di dosaggio immunologico utilizza sostanze o enzimi chemiluminescenti come marcatori, che sono direttamente etichettati sull'antigene o sull'anticorpo, e il complesso immunitario antigene-anticorpo si forma attraverso la reazione tra l'antigene e l'anticorpo. Il sistema di analisi in chemiluminescenza è un substrato luminescente a cui viene aggiunto un ossidante o un enzima dopo la reazione immunitaria. Dopo che la sostanza chemiluminescente viene ossidata dall'ossidante, si forma un intermedio in uno stato eccitato, che emette fotoni per rilasciare energia per tornare ad uno stato fondamentale stabile. L'intensità della luminescenza può essere rilevata utilizzando uno strumento di misurazione del segnale di luminescenza. In base alla relazione tra il marcatore di chemiluminescenza e l'intensità della luminescenza, il contenuto dell'analita può essere calcolato utilizzando la curva standard.

 

Tre diversi sistemi di etichettatura di CLIA

 

 

CLIA dispone di tre diversi sistemi di etichettatura in base alla differenza del meccanismo chimico-fisico dell'emissione luminosa:

 

Etichetta Prodotto chimico direttamente coinvolto nella reazione di emissione di luce
Questo tipo di sostanza chimica con struttura speciale può trasferirsi in uno stato eccitato attraverso una reazione chimica. I fotoni verrebbero rilasciati quando la sostanza chimica scende allo stato fondamentale dallo stato eccitato. La sostanza chimica tipica è l'estere di acridinio e i suoi derivati. L'esposizione di un'etichetta di estere di acridinio a una soluzione alcalina di perossido di idrogeno attiva un lampo di luce. Uno sviluppo successivo sono state le etichette dell'estere sulfamidico di acridinio. Viene anche attivato dal perossido di idrogeno alcalino per emettere un lampo di luce.

 

Reazione di emissione di luce catalizzata da enzimi
Questo tipo di chemiluminescenza utilizza enzimi per marcare l'anticorpo. Tecnicamente parlando, è un test immunoenzimatico che utilizza una sostanza chimica luminescente come substrato invece del cromogeno. Gli enzimi più utilizzati sono la perossidasi di rafano (HRP) e la fosfatasi alcalina (AP), ciascuno ha i propri substrati luminescenti. Il luminol è un substrato chemiluminescente molto comune utilizzato per il rilevamento dell'HRP. L'HRP catalizza la decomposizione del luminolo in presenza di perossido per produrre uno stato eccitato intermedio. Lampi di luce visibile (massimo a 425 nm) vengono emessi durante il decadimento dell'intermedio singoletto.

 

Reazione Redox Reazione di emissione di luce mediata
Un altro sistema CL è degno di nota perché il reagente viene rigenerato e quindi può essere riciclato. Questo sistema utilizza rutenio tris-bipiridina (bpy) come etichetta e prevede la reazione di Ru(bpy)33+ e Ru(bpy)3+ per produrre uno stato eccitato di Ru(bpy)32+ , una specie stabile che decade allo stato fondamentale emettendo un'emissione arancione a 620 nm. Ru(bpy)33+ e Ru(bpy)3+ possono essere elettrogenerati da Ru(bpy)32+ mediante riduzione a circa -1,3 V e ossidazione a circa { {10}}.3 V. Questo sistema è dedicato all'elettrochemiluminescenza con sensibilità e specificità ultraelevate.

 

Vantaggi del sistema di immunodosaggio in chemiluminescenza

Alta sensibilità
La sensibilità è la chiave per le prestazioni superiori dell'analizzatore immunologico. La sensibilità di alcuni analizzatori può raggiungere 10 -16 mol/L (RIA per 10-12 mol/L). Un altro esempio sono i substrati chemiluminescenti (come l'AMPPD), la concentrazione di fosfatasi alcalina può essere rilevata rispetto al substrato cromogenico per essere sensibile 5 x 10 ^ 5 volte.

Ampio intervallo cinetico lineare
L'intensità della luminescenza del test immunologico in chemiluminescenza è lineare tra 4 e 6 ordini di grandezza rispetto alla concentrazione della sostanza misurata. Questo è un vantaggio significativo rispetto all'intervallo di assorbanza (OD) di 2,0 per i test immunoenzimatici colorimetrici.

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Lunga durata del segnale luminoso

 

Il tipo a incandescenza CLIA produce un segnale luminoso che dura per ore o addirittura un giorno. Ciò certamente semplifica l'operazione sperimentale e la misurazione.

Il metodo di analisi è semplice e veloce

La maggior parte degli analizzatori immunologici a chemiluminescenza sono in modalità one-step che richiedono solo l'aggiunta di un reagente (o una combinazione di reagenti).

Risultati stabili, piccolo errore

 

Il campione emette direttamente luce da sola, senza alcuna irradiazione della sorgente luminosa, eliminando l'impatto di vari possibili fattori (stabilità della sorgente luminosa, diffusione della luce, selettore dell'onda luminosa, ecc.) sull'analisi. Ciò rende i risultati dell'analisi sensibili, stabili e affidabili.

Buona sicurezza e lunga durata

L'analizzatore immunologico chemiluminescente elimina l'uso di sostanze radioattive. Finora non è stato riscontrato che sia dannoso. Inoltre, i reagenti utilizzati per il test immunologico sono stabili e possono essere conservati fino a un anno.

 

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Componenti di CLIA
  • 96-piastra per microtitolazione e sigillanti
  • Diluente del campione
  • Anticorpi di cattura e/o rilevazione
  • Coniugato avidina/HRP
  • Tampone di lavaggio
  • Soluzione del substrato
  • Protocollo dettagliato

 

 
Applicazioni del sistema di immunodosaggio in chemiluminescenza
 

 

01/

Diagnostica clinica:CLIA è ampiamente utilizzato nei laboratori clinici per diagnosticare varie malattie e condizioni mediche. Può misurare biomarcatori, ormoni, anticorpi e altri analiti indicativi di malattie specifiche.

02/

Endocrinologia:È comunemente usato per valutare la funzione tiroidea, i livelli degli ormoni riproduttivi e i livelli degli ormoni surrenali, aiutando nella diagnosi e nella gestione dei disturbi endocrini.

03/

Monitoraggio dei farmaci terapeutici (TDM):CLIA viene utilizzato nel TDM per misurare le concentrazioni di farmaci nel sangue, garantendo che i farmaci rientrino nell'intervallo terapeutico ottimale.

04/

Allergia e immunologia:CLIA viene utilizzato per rilevare gli anticorpi IgE specifici per l'allergene nel sangue, aiutando nella diagnosi delle allergie. Viene anche utilizzato per valutare la risposta immunitaria e i livelli di anticorpi in vari disturbi immunologici.

05/

Test sulle malattie infettive:CLIA è ampiamente utilizzato per rilevare agenti infettivi, come virus, batteri e parassiti, in campioni clinici.

06/

Test sulle malattie autoimmuni:CLIA viene utilizzato per rilevare gli autoanticorpi associati a malattie autoimmuni, come l'artrite reumatoide, il lupus eritematoso sistemico e la sclerosi multipla.

07/

Biomarcatori oncologici e tumorali:CLIA viene applicato in oncologia per rilevare marcatori tumorali e antigeni specifici del cancro.

08/

Salute riproduttiva:CLIA è utilizzato nella salute riproduttiva per misurare gli ormoni legati alla fertilità e alla gravidanza.

09/

Test antidroga:CLIA viene impiegato in programmi di test antidroga, screening antidroga sul posto di lavoro e tossicologia forense per rilevare droghe di abuso o farmaci terapeutici in campioni biologici, come urina e sangue.

10/

Ricerca medica:CLIA è uno strumento essenziale nella ricerca medica per quantificare le biomolecole e studiare i meccanismi delle malattie. Aiuta a comprendere la progressione della malattia, a identificare nuovi biomarcatori e a valutare potenziali interventi terapeutici.

 

Procedura del sistema di immunodosaggio in chemiluminescenza

 

 
 

Definire l'intervallo dinamico previsto

 

È importante determinare l'intervallo di concentrazione approssimativo dell'analita nel campione. Inoltre, è necessario capire quale sia l'intervallo di concentrazione ottimale consigliato per rilevare l'analita desiderato.

 
 

Definire il campione analizzato

 

Il tipo di campione (ad esempio sangue, siero, urina, ecc.) aiuterà a comprendere l'intervallo dinamico previsto dell'analita contenuto nel campione.

 
 

Selezionare gli anticorpi da utilizzare nel test

Ti consigliamo di selezionare anticorpi altamente specifici per il tuo analita unico. La specificità è la chiave per il successo del test.

 
 

Scegli le tue migliori perline magnetiche

 

Sarà necessario determinare quali devono essere le dimensioni ottimali delle sfere, la superficie delle sfere e il contenuto di ossido di ferro per il test dell'analita specifico.

 
 

Ottimizzare la procedura di rivestimento

 

Quando rivesti le tue perle, dovrai prendere in considerazione le proprietà di adsorbimento delle perle, qualsiasi legame covalente che dovrai creare e gli effetti biologici del collegamento delle proteine ​​alle tue perle, o se avrai bisogno di quelle bioattivate.

 
 

Seleziona il tuo metodo di omogeneizzazione

 

La scelta dell'omogeneizzazione dipenderà dall'attrezzatura di cui disponi, dal personale che lavora sull'attrezzatura, dalle dimensioni dei campioni e dalla facilità d'uso all'interno del test.

 
 

Selezionare la tecnologia di separazione biomagnetica corretta

Questa tecnologia aiuta a rimuovere anticorpi liberi e altri contaminanti. Sono preferiti i sistemi che possono aiutarti a convalidare facilmente il tuo processo e ad ampliarlo.

 
 

Migliora i tuoi test immunologici quando richiesto

Se puoi migliorare il tuo test, è importante farlo. Rendere il test più efficiente, più accurato e più facile da eseguire è importante per i risultati finali dell'analisi.

 

Interpretazione dei risultati

1.L'unità di concentrazione predefinita di questo test è ng/mL o nmol/L.
Fattore di conversione:

  • o ng/mL x 2,5=nmol/L
  • o nmol/L x 0.4= ng/mL

2.A causa delle differenze metodologiche o della specificità degli anticorpi, potrebbero esserci delle deviazioni tra i risultati dei test dei reagenti di diversi produttori. Pertanto, non dovrebbero essere effettuati confronti diretti per evitare false interpretazioni.

3.Quando la concentrazione di 25-OH VD nel campione supera 100,00 ng/mL, è possibile eseguire una diluizione del campione prima della misurazione (si consiglia 2-volte la diluizione).

4.Qualsiasi risultato inferiore al limite minimo di rilevamento verrà segnalato come<3.00 ng/mL; any result above the maximum detection limit will be reported as >100,00 ng/ml.

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Precauzioni per la manipolazione
 

Non utilizzare i kit di reagenti oltre la data di scadenza.

 

Non scambiare i componenti dei reagenti provenienti da reagenti o lotti diversi.

 

Prima di caricare il kit di reagenti sul sistema per la prima volta, è necessario miscelare il kit di reagenti per risospendere le microsfere magnetiche che si sono depositate durante la spedizione. Per le istruzioni sulla miscelazione delle microsfere magnetiche, fare riferimento alla sezione Preparazione del reagente di questo foglietto illustrativo.

 

Per evitare la contaminazione, indossare guanti puliti quando si utilizza un kit di reagenti e un campione.

 

Nel tempo, i liquidi residui potrebbero seccarsi sulla superficie del setto. Si tratta in genere di sali essiccati che non hanno alcun effetto sull'efficacia del test.

 

Per evitare l'evaporazione del liquido nei kit di reagenti aperti in un frigorifero, si consiglia di sigillare i kit di reagenti aperti con i sigilli dei reagenti contenuti all'interno della confezione. I sigilli dei reagenti sono "monouso" e se sono necessari più sigilli, contattaci.

 

Il nostro certificato

 

Abbiamo superato vari certificati come CE e ISO e i prodotti che forniamo hanno la garanzia della qualità.

CE
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ISO
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Problemi comuni del sistema di immunodosaggio in chemiluminescenza

 

D: Cos'è la tecnica di immunodosaggio in chemiluminescenza?

R: Il test immunologico in chemiluminescenza (CLIA) è un test che combina la tecnica della chemiluminescenza con reazioni immunochimiche. Similmente ad altri test immunologici marcati (RIA, FIA, ELISA), CLIA utilizza sonde chimiche che potrebbero generare emissione di luce attraverso una reazione chimica per marcare l'anticorpo.

D: A cosa serve l'analizzatore immunologico a chemiluminescenza?

A: Analizzatore immunologico chemiluminescente 4 test clinici comuni
Rilevazione dei marcatori tumorali.
Test di funzionalità tiroidea.
Test degli ormoni endocrini.
Rilevazione di malattie infettive.

D: Qual è la differenza tra ELISA e CLIA?

R: Nel confronto tra ELISA e CLIA, il CLIA è altamente sensibile. ELISA misura la densità ottica, mentre CLIA misura l'unità di luce relativa. In base all'intervallo di rilevamento, l'intervallo CLIA è elevato rispetto a ELISA. Il CLIA è un test rapido, mentre l’ELISA richiede molto tempo. L'ELISA è un test economicamente vantaggioso rispetto al CLIA. Oltre a questi confronti, gli studi precedenti hanno anche riportato che il CLIA è migliore rispetto all’ELISA.

D: Come funziona il test di chemiluminescenza?

R: Gli enzimi utilizzati nel test immunologico con microparticelle chemiluminescenti convertono un substrato in un prodotto di reazione, che emette un fotone di luce invece di sviluppare un colore particolare. Luminescenza significa che la luce viene emessa da una sostanza quando ritorna da uno stato eccitato a uno stato fondamentale.

D: Quali sono i tipi di test immunologici in chemiluminescenza?

A: etichettare antigeni o anticorpi con agenti di chemiluminescenza. Il dosaggio immunoenzimatico chemiluminescenza è un dosaggio immunoenzimatico marcato con enzima che utilizza agenti di chemiluminescenza come substrati per le reazioni enzimatiche. Il test immunologico in chemiluminescenza con microparticelle ha due metodi. Il test immunologico con elettrochemiluminescenza è una reazione di luminescenza specifica avviata dall'elettrochimica sulla superficie dell'elettrodo.

D: Come funziona CLIA?

R: I test immunologici chemiluminescenti (CLIA) combinano i vantaggi della sensibilità della chemiluminescenza con la specificità di un'immunoreazione. In questa tecnica, un enzima converte un substrato in un segnale chemiluminescente che viene emesso sotto forma di fotoni di luce nel campo del visibile o del vicino visibile.

D: Quanto è accurato il test immunologico in chemiluminescenza?

R: Al valore limite stabilito dal produttore di 10 AU/mL, la sensibilità era del 73,3% e del 76,7% e la specificità era del 92,2% e del 100% rispettivamente per gli anticorpi IgM e IgG. Abbiamo riportato quattro risultati positivi per IgM nel gruppo di controllo: due casi di infezione da citomegalovirus, uno con sclerodermia e un paziente con lupus eritematoso sistemico.

D: Qual è lo scopo della chemiluminescenza?

R: La tecnica della chemiluminescenza è ampiamente utilizzata nell'industria farmaceutica per individuare la contaminazione di composti biologici e verificare la presenza di impurità nei farmaci. Inoltre, la tecnica viene utilizzata anche per misurare i livelli di ormoni. Infine la chemiluminescenza viene utilizzata anche per rilevare molti farmaci nei fluidi corporei.

D: Cos'è l'analisi della chemiluminescenza?

R: La luminescenza è il fenomeno per cui la materia emette luce di una lunghezza d'onda specifica senza emettere calore e ritorna allo stato fondamentale da uno stato eccitato dopo aver assorbito energia esterna da un'onda elettromagnetica, calore, attrito, campo elettrico o reazione chimica.

D: Perché CLIA è migliore di ELISA?

R: Mentre ELISA non può leggere valori superiori a 3.0 OD richiedendo quindi la diluizione del campione, CLIA può leggere un intervallo dinamico di 106 o 107 aumentando significativamente la linearità del test e riducendo l'overflow. Inoltre, un fondo basso (rapporto segnale/rumore elevato) consente un'interpretazione più chiara delle basse concentrazioni di analiti.

D: CLIA è un ELISA?

R: Il test immunoassorbente legato all'enzima (ELISA) e il test immunologico in chemiluminescenza (CLIA) sono due test frequentemente utilizzati per la quantificazione dell'Anti-HBs, tra gli altri test, tra cui il test radioimmunologico e il test immunoenzimatico delle microparticelle (MEIA). Tuttavia, ELISA e CLIA si basano su principi di test diversi.

D: CLIA è un metodo diagnostico immunologico?

R: La base del metodo CLIA è simile a quella dell'ELISA, tranne per il fatto che i substrati CLIA possono generare emissione di luce in presenza di un enzima, fornendo un processo più sensibile rispetto all'ELISA. Substrati come isoluminolo o estere di acridinio producono il segnale di luminescenza in presenza di perossido di idrogeno ed enzima. Il test immunologico con elettrochemiluminescenza (ECLIA), un altro tipo di CLIA, utilizza la corrente elettrica per ossidare il substrato.

D: Quali sono i vantaggi del test di chemiluminescenza?

R: I vantaggi dell'utilizzo della chemiluminescenza in immunologia includono elevata sensibilità, stabilità e comodità per l'operatore. Gli svantaggi non sono menzionati nel testo. Vantaggi: alta sensibilità, ampia gamma dinamica lineare, segnale ottico di lunga durata.

D: Che cos'è il test immunologico in chemiluminescenza rispetto alla fluorescenza?

R: La differenza fondamentale tra chemiluminescenza e fluorescenza è che la chemiluminescenza è la luce emessa come risultato di una reazione chimica, mentre la fluorescenza è la luce emessa come risultato dell'assorbimento di luce o radiazione elettromagnetica.

D: Quali sono i componenti del test immunologico in chemiluminescenza?

R: Il dosaggio immunologico in chemiluminescenza è uno strumento di dosaggio immunologico che marca direttamente l'antigene o l'anticorpo con un agente chemiluminescente. L'analizzatore immunologico chemiluminescente contiene due parti, ovvero il sistema di immunoreazione e il sistema di analisi chemiluminescente.

D: Il test immunologico e l'ELISA sono la stessa cosa?

R: ELISA (saggio immunoassorbente legato all'enzima) è una tecnica di analisi su piastra progettata per rilevare e quantificare sostanze solubili come peptidi, proteine, anticorpi e ormoni. Altri nomi, come dosaggio immunoenzimatico (EIA), vengono utilizzati anche per descrivere la stessa tecnologia.

D: Perché abbiamo bisogno di CLIA?

R: Il programma Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA) regola i laboratori che analizzano i campioni umani e garantisce che forniscano risultati accurati, affidabili e tempestivi dei test sui pazienti, indipendentemente da dove viene eseguito il test. CMS supervisiona tutti i test di laboratorio (tranne alcune ricerche) effettuati sugli esseri umani negli Stati Uniti attraverso CLIA.

D: Il CLIA è un test di conferma?

R: CLIA, un metodo di nuova concezione, può consentire il rilevamento rapido di anticorpi specifici per T. pallidum su analizzatori ad accesso casuale con precisione, sensibilità e specificità più elevate. E il TPPA, come test di conferma, può garantire la sua sensibilità e specificità per la diagnosi dell’infezione da sifilide utilizzando T.

D: Quali sono alcuni svantaggi della chemiluminescenza?

R: Gli svantaggi del test di chemiluminescenza includono:
Rilevamento Ag limitato.
Sistemi analitici chiusi.
Pannello di test limitato.
Costi più elevati.

D: Cos'è il test immunologico in chemiluminescenza potenziata?

R: La chemiluminescenza avanzata (ECL) è una tecnica di rilevamento basata sulla chemiluminescenza di substrati come luminol e acridan. Grazie all'elevata sensibilità, all'ampio intervallo dinamico e all'elevato rapporto segnale-rumore, l'ECL è uno dei metodi di rilevamento più popolari per una varietà di applicazioni di western blotting ed è anche ampiamente utilizzato per quantificare analiti biologici come DNA, RNA così come le cellule.

D: Qual è la differenza tra CLIA e Cleia?

R: CLIA utilizza CL per marcare l'anticorpo e introducendo i substrati CL, il sistema produce CL; pertanto, i campioni possono essere sottoposti a screening quantitativo. Il derivato dell'estere di acridinio è stato utilizzato come substrato per CL, mentre CLEIA ha utilizzato la perossidasi per etichettare un anticorpo e il luminolo come substrato.

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